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有奖答题：蓝牙耳机、充电宝、台灯、京东卡等 300 份好礼包邮送！|京东卡|台灯|培养基|探针|细胞|蓝牙耳机|试剂_手机网易网 网易 网易号 有奖答题：蓝牙耳机、充电宝、台灯、京东卡等 300 份好礼包邮送！ 生物学霸 2025-09-26 17:30 ·浙江 ·网易号健康内容作者

师兄，我的培养基脱气少了一会，OCR 和 ECAR 的基线波动就很大

如果没有充分脱气，放入仪器后培养基里溶解的 CO₂ 会迅速逸出，导致 pH 持续上升，细胞代谢状态会受到影响，数据也就不能反映真实情况了。

崩溃！就凑合了这一步，一整周白干了！

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做细胞能量代谢检测都要注意哪些细节呢？这就以最常用的【ATP 产生速率检测】为例，为大家详解实验准备和操作方案：

实验前一天

1. 打开 Seahorse 代谢分析仪，使温度稳定。

2.对于贴壁细胞，用适当的细胞生长培养基将细胞以预先确定的密度接种到 Seahorse XF 微孔板（悬浮细胞在实验当天准备即可）。

3.在 37℃ 无 CO₂ 培养箱中过夜水化探针板。

4. 在 Wave 里设计实验或使用 ATP 产生速率实验模板（标准或诱导的实验）。根据特定实验设计，对模板进行必要的分组修改。

实验当天

1. 无菌条件下，往 100 mL Seahorse XF DMEM 培养基，pH 7.4 中添加 10 mM XF 葡萄糖，1 mM XF 丙酮酸钠，2 mM XF 谷氨酰胺。这些是推荐的起始条件；然而，所需的检测液组分可根据细胞类型或体外培养条件而改变。

2. 温热检测液到 37℃。

3. 37℃ 孵育直至准备使用。

注意：如果检测液与此配方有显著不同（即更高浓度的 XF 葡萄糖，XF 丙酮酸钠或 XF 谷氨酰胺和 / 或其他培养基添加剂），如有必要，检查检测液的 pH 值并调至 7.4，需按照 Buffer Factor Protocol 测定缓冲系数值。

准备 Seahorse XF 细胞培养微孔板：

对于贴壁细胞：

1. 从 37℃ CO₂ 培养箱中取出细胞培养微孔板，在显微镜下检查细胞以确认种板的一致性和正常的细胞形态。

2．弃去细胞培养微孔板中的细胞生长培养基。使用多通道移液器用预热的检测液洗细胞一次，然后置于 37℃ 无 CO₂ 培养箱中用检测液孵育 45～60 分钟。

3. 在开始 XF 实验前，再次弃去检测液并在每孔加入新鲜，预热的检测液。

对于悬浮细胞：

1. 从生长培养基中沉淀细胞，并用预热的检测液重悬。

2. 计数细胞，以这样一个浓度悬浮细胞，即 50 μL（XF96 / XFe96）或 100 μL（XFe24）细胞包含每孔所需要的细胞数，留 4 个没有细胞的孔作为背景校正孔。

3. 加入所需的细胞 / 孔，然后温和地离心使细胞贴壁。

4. 每孔轻轻加入检测液。实验前将板子放在 37℃ 无 CO₂ 的培养箱中孵育 45～60 分钟。

准备化合物储液（现配现用）：

1. 轻弹试剂管子确保在打开管子前粉末在管子底部。

2. 按照下表，用适当体积的检测液重悬每种组分。旋涡震荡约 1 min 以确保化合物完全重悬。

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准备加入探针板加药孔中的化合物：按下表所示，每种化合物各用检测液配制 3 mL。推荐使用 1.5 μM 的寡霉素和 0.5 μM 的鱼藤酮 + 抗霉素 A（终浓度）。

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将化合物加入探针板加药孔中

标准实验- 在寡霉素和鱼藤酮/抗霉素 A 之前没有急性注射。将化合物加入已水化的探针板加药孔中：加药孔 A：寡霉素 加药孔 B：鱼藤酮/抗霉素 A

诱导实验- 注射一种测试化合物，加入加药孔 A 中，按如下所示：加药孔 A：实验化合物（急性注射）或溶剂对照 加药孔 B：寡霉素 加药孔 C：鱼藤酮 / 抗霉素 A

运行 XF 实时 ATP 速率测定

安捷伦科技有限公司是生命科学与研究领域的全球领导者，始终致力于提供前沿的分析解决方案与创新技术。在细胞代谢研究领域，安捷伦推出的 Seahorse XF 分析仪被誉为活细胞能量代谢实时检测的「金标准」，深受全球科研人员及药物开发专家的信赖。

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内容策划：沈佳钰

内容审核：朱晓芳

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